客户功效分享 | 操纵Micro-CT检测小鼠样本骨构造形状

更新时候：2025-05-22

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　　浙江西医药大学从属杭州市西医院胡劲涛等传授在知网宣布的《补充肾活泼血方对去势骨质松散小鼠骨-血管构成偶联调理感化的尝试研讨》，切磋了补充肾活泼血方对去势骨质松散小鼠骨量及骨代谢的影响。

　　尝试中操纵了布鲁克Micro-CT仪器，三维重修了小鼠的骨构造形状图象。

　　弁言

　　绝经后骨质松散是绝经女性的罕见藏匿安康要挟，特点为骨量减、布局退变，骨折风险大增。约半数绝经女性得病，骨质松散性骨折率18%～23%，严峻影响糊口品质。骨构造血管丰硕，血管与骨构成慎密相干，绝经后骨构造血管削减。肾虚血瘀型多见，补充肾活泼血方(基于右归饮加桃仁、红花)疗效较着。

　　本研讨用补充肾活泼血方治疗去势骨质松散小鼠，切磋其对骨-血管构成及骨代谢的影响。

　　尝试前瞻

　　一、尝试仪器：

　　尝试仪器JB-P5包埋机；RM2016病理切片机；Bruker Skyscan1272三维X射线显微成像体系；E100光学显微镜。

Bruker Skyscan1272

　　二、尝试筹办：

　　尝试植物拔取50只4～5周龄SPF级安康雌性ICR小鼠,在室温(24±2)℃、湿度40%～60%、12 h日夜瓜代照明的环境下豢养。

　　三、植物分组：

　　40只ICR小鼠顺应性豢养1周，按随机数字表法分为假手术组(10只)和去势组(30只)。

　　四、造模：

　　去势小鼠造模接纳舒泰80 mg/kg腹腔打针麻醉及阿托品0.04 mg/kg肌注削减气道排泄物。麻醉实现后剃除小鼠腹部毛发，予以聚维酮消毒3次后铺无菌巾。取腹部正中暗语，逐层切开腹部肌肉及腹膜，沿输卵管寻觅到卵巢，摘除卵巢，缝合伤口。假手术模子行只切除卵巢四周等量脂肪构造。

　　五、术后处置与分组：

　　去势组小鼠行卵巢去势手术后惯例豢养8周，随机抽取3只小鼠证明骨质松散造模胜利后，随机取20 只成模小鼠按随机数字表法分为模子组和中药组，每组各10只。

　　六、给药:

　　假手术组及模子组：等量心理盐水灌胃。

　　中药组：补充肾活泼血方按小鼠给药剂量换算得小鼠含生药剂量为8.6 mg/kg，逐日灌胃1次。

　　七、样本搜集:

　　干涉干与8周后正法，搜集样本。

　　八、尝试展开：

　　停止Micro-CT、TRAP染色、免疫荧光染色( EM-CN、CD31) 、骨代谢目标检测。

　　尝试进程

　　一、Micro-CT检测骨构造形状

　　小鼠正法后，咱们搜集了股骨标本，并细心剔除了骨构造四周的肌肉及肌腱构造。接着，咱们操纵了Bruker Skyscan1272三维X射线显微成像体系，根据设定的参数(电流140 μA、电压70 keV、扫描厚度12 μm)对股骨远端停止了扫描。随后，咱们操纵了Bruker CTAn Micro-CT Software对骨构造形状停止了阐发，重点存眷的目标包含：骨体积百分比(BV/TV)、小梁数目(Tb.N)和小梁厚度(Tb.Th)。

　　二、TRAP染色察看破骨细胞数目

　　为了察看破骨细胞的数目，咱们对骨构造停止了脱钙包埋处置，并制成了4 μm厚的白腊切片。接着，咱们停止了TRAP染色，并在显微镜下对破骨细胞的数目停止了察看。为了更切确地阐发功效，咱们接纳了Image J软件停止了图象阐发。

　　三、免疫荧光染色察看股骨远端干骺端CD31、EMCN阳性抒发

　　咱们起首对白腊切片停止了脱蜡、抗原修复和封锁处置。而后，咱们停止了一抗(CD31、EMCN)的4 ℃孵育留宿。第二天，咱们停止了响应的二抗孵育，并随后接纳了DAPI染液停止染色。在荧鲜明微镜下，咱们停止了图片收罗，并再次接纳了Image J软件停止了图象阐发。

　　四、骨代谢目标检测

　　为了检测骨代谢目标，咱们搜集了小鼠的腹自动脉血液，并经由过程200g向心力离心5分钟来搜集血清。接着，咱们操纵了ELISA法检测了骨构成目标I型前胶原氨基结尾肽(PINP)和骨接收目标抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)。

　　尝试功效

　　一、各组小鼠骨构造形状的比拟

　　Micro-CT三维重修图象显现假手术组骨小梁较多，模子组骨小梁较着削减，中药组较模子组骨小梁增添。见图1。定量阐发功效显现，假手术组骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)高于模子组和中药组，而中药组BV/TV、Tb.N、Tb.Th高于模子组，差别具备统计学意思(P<0.05)。见表1。

图1 各组小鼠胫骨Micro-CT三维重修横断面

表1 各组小鼠Micro-CT检测功效比拟

　　二、各组小鼠骨构造破骨细胞数目的比拟

　　骨构造TRAP染色及定量阐发显现，模子组TRAP阳性抒发的数目高于假手术组和中药组，而假手术组TRAP阳性抒发的数目少于中药组，差别具备统计学意思(P<0.05)。见图2～图3。

图2 各组小鼠TRAP染色功效(×40)

图3 各组小鼠破骨细胞定量阐发比拟

　　四、各组小鼠股骨远端干骺端CD31、EMCN阳性抒发血管比拟

　　操纵CD31、EMCN对股骨远端干骺端停止荧光双标以检测H血管的构成环境，功效显现模子组干骺端H血管的比例比拟假手术组较着削减，中药组干骺端H血管的比例较模子组增添，但低于假手术组，差别具备统计学意思(P<0.05)。提醒补充肾活泼血方能够增进去势骨质松散小鼠干骺端血管的构成。见图4。

图4 各组小鼠干骺端骨构造 CD31 + EMCN 阳性面积比拟

　　五、各组小鼠血清骨代谢目标比拟

表2 各组小鼠血清PINP、TRACP程度比拟

　　功效

　　补充肾活泼血方可经由过程增进骨-血管构成,增添骨天生,削减骨接收,进步去势骨质松散小鼠的骨量。

　　绝经后骨质松散症(PMOP)的首要病症为腰背痛苦悲伤、骨畸形和乏力，西医视其为“骨痿”“骨痹”，以为与肾虚血瘀有关。男子绝经后肾精亏虚，致使骨骼发展维系受影响，构成肾虚血瘀的恶性轮回。补充肾活泼血是治疗PMOP的主要准绳，补充肾活泼血方经由过程补充肾健骨、活泼血祛瘀到达治疗结果，研讨显现它能增添去势骨质松散小鼠的骨量和骨小梁数目及厚度。

　　最近几年来，研讨发明H型血管与骨发展紧密亲密相干，H血管削减是PMOP的风险身分。骨质松散女性血管内皮发展因子抒发程度较低，与骨构成目标和骨密度正相干。增进H血管构成能够按捺破骨细胞功效，增添骨构成，防备和治疗PMOP。

　　本文内容来历：

　　//kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=ifIT5_n5_GcV1J_62qIHt2mBULHLQLCH4IWu6b64IT-78Jz0V-qsV_jEX9rQg4MkMVNFmmiGcMSeGcofaLVoYoFta95NF_7dxzSaw4pKVV3dVneVV9Stp1xYCEFSyzqDMOJ88t1_3boQq7t4WlNQ0GlGIknHwpDg9FafXnFJjp8J1zw64PRwHODibLrhrDzgM_vj567UCeOt8rqmHfOypw==&uniplatform=NZKPT

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